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SDA沙氏葡萄糖琼脂培养基的标准化制备方法分享

更新时间：2025-12-02

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　　SDA沙氏葡萄糖琼脂培养基是真菌分离与培养的基础培养基，广泛应用于临床微生物检验、药品无菌检查、化妆品微生物限度测试及环境真菌监测等领域。其低pH（约5.6）环境可有效抑制细菌生长，同时富含葡萄糖和蛋白胨，为酵母菌、霉菌等真菌提供理想营养。然而，若配制过程不规范，易导致pH偏差、凝固不良或污染，直接影响真菌检出率与实验可靠性。掌握SDA沙氏葡萄糖琼脂培养基标准化制备方法至关重要。

　　一、原料与水质要求

　　培养基干粉：选用符合《中国药典》或USP标准的商品化SDA干粉，避免自行配比误差；

　　溶剂：必须使用纯化水或去离子水（电导率≤5.1μS/cm），禁用自来水（含氯、矿物质干扰真菌生长）；

　　典型配方（每升）：葡萄糖40g、蛋白胨10g、琼脂15–20g，pH自然约为5.6（无需额外调酸）。

　　二、规范配制流程

　　称量：按说明书准确称取干粉（通常49–55g/L），避免多加琼脂导致过硬或葡萄糖过量抑制某些真菌；

　　溶解：将干粉缓慢加入水中，边加边搅拌，防止结块；

　　加热煮沸：置于电炉或微波炉中加热至沸腾，持续1–2分钟，确保琼脂溶解、培养基澄清；

　　分装：趁热分装至洁净试管或平皿（平皿约15–20mL/90mm），避免冷凝水过多；

　　灭菌：121℃高压蒸汽灭菌15分钟，严禁延长灭菌时间，否则葡萄糖焦化变褐，影响真菌生长；

　　冷却凝固：灭菌后自然冷却至约50℃再倾注平皿，室温水平静置凝固，避免震动产生气泡或表面不平。

　　三、关键质量控制点

　　pH验证：灭菌前测pH应为5.4–5.8，若偏高可滴加1mol/LHCl微调（一般无需调整）；

　　无菌检验：随机抽取3%成品于20–25℃培养5天，确认无菌生长；

　　促生长试验：接种标准菌株（如白色念珠菌ATCC10231、黑曲霉ATCC16404），48–72小时内应良好生长，菌落形态典型。

　　四、储存与使用注意事项

　　避光冷藏：制备好的平板或斜面应密封（如用封口膜）后于2–8℃保存，有效期通常≤14天；

　　使用前回温：从冰箱取出后室温平衡30分钟，避免冷凝水稀释表面；

　　禁止反复融化：已凝固的SDA不可二次加热使用，以免营养破坏。